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目的建立一種檢測奇異變形桿菌（Proteus mirabilis）快速且特異的PCR方法。方法針對編碼奇異變形桿菌脲酶調節(jié)子（ureR）的基因序列設計2條PCR引物,擴增片段長度為225bp;通過對2株奇異變形桿菌和14株非奇異變形桿菌進行PCR檢測、利用該PCR方法和傳統(tǒng)分離培養(yǎng)法同時對60份食物中毒送檢標本進行檢測來評價其特異性;將奇異變形桿菌菌液做一系列10倍稀釋后進行PCR檢測來對其進行敏感性分析。結果2株奇異變形桿菌出現(xiàn)PCR擴增反應,擴增產(chǎn)物經(jīng)測序鑒定正確,14株非奇異變形桿菌沒有出現(xiàn)PCR擴增反應,且PCR檢測奇異變形桿菌的結果與傳統(tǒng)培養(yǎng)方法一致,PCR方法相比傳統(tǒng)培養(yǎng)方法更快速,在4h內(nèi)即可完成擴增反應;PCR方法敏感性為30cfu/ml。結論建立了一種快速、準確檢測奇異變形桿菌的PCR方法,適合奇異變形桿菌日常監(jiān)測和快速診斷的需要。
初的PCR技術相當不成熟，在當時是一種操作復雜、成本高昂、“中看不中用”的實驗室技術。1988年初，Keohanog通過對所使用的酶的改進，提高了擴增的真實性。而后，Saiki等人又在黃石公園從生活在溫泉中的水生嗜熱桿菌內(nèi)提取到一種耐熱的DNA聚合酶，使得PCR技術的擴增效率大大提高。也正是由于此酶的發(fā)現(xiàn)使得PCR技術得到了廣泛地應用，使該技術成為遺傳與分子生物學 分析的根本性基石。在以后的幾十年里，PCR方法被不斷改進：它從一種定性的分析方法發(fā)展到定量測定；從原先只能擴增幾個kb的基因到目前已能擴增長達幾十個kb的DNA片段。到目前為止，PCR技術已有十幾種之多，例如，將PCR與反轉錄酶結合，成為反轉錄PCR，將PCR與抗體等相結合就成為免疫PCR等。
